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  • 心血管指标和临床应用知识

    什么是NACB关于心血管指标在冠状动脉疾病应用的推荐指南?
    NACB(美国临床生化学会)是AACC下面的一个高级专家委员会,专门负责制定一些检验医学应用准则(LMPGs)。关于心血管指标在冠状动脉疾病应用的推荐指南是1999年该委员会制定出的第一个推荐指南。其关于cTn临床应用建议的主要内容也是与国际临床化学联盟(IFCC)、欧洲心脏病学会(ESC)和美国心脏病学会(ACC)等知名学会所制定的建议(Recommendation)或导则(Guidelines)基本相一致。

    NACB/IFCC/ESC/ACC关于cTn临床应用的建议对检测试剂有何要求?
    对于cTn作为一个特异性心血管指标用于临床对心肌梗死(MI)的诊断或急性冠脉综合症(ACS)的危险分层提出了对试剂的要求,如:检测的灵敏度,不精密度的要求,抗体必须检测cTn分子的稳定结构区域,没有嗜异性抗体的干扰,对样品没有抗凝剂(尤其是肝素)的要求,Cut-off值设定在> 99%分位值,试剂在此值的不精密度<10%CV,检测的周转时间(TAT)要小于1个小时等。

    心肌标志物如何在心肌细胞内分布和释放的?
    心肌标志物主要包括肌红蛋白,CK-MB和肌钙蛋白。根据这些蛋白质的尺寸大小和所处位置决定其释放的时间。最小的肌红蛋白存在于细胞质内,首先释放。存在于核子和线粒体内的CK-MB随后释放。而存在于收缩器内结构蛋白-cTn要等细胞完全裂解后才会释放,专家一致认为心肌细胞死亡后,cTn才释放。

    肌钙蛋白复合物由哪些亚单位组成?
    肌钙蛋白复合物存在于所有类型的横纹肌细胞中,由三种亚单位组成:I,T和C。其中只有I和T具有心肌特异性,所以可以作为心肌特异性的指标。肌钙蛋白复合物扮演一个传递Ca信号引起肌肉收缩的角色。

    外周血循环中肌钙蛋白I主要以哪些形式存在?
    在外周血循环中,cTnI可以有多种形式存在,很多是以复合物的形式存在,如二元TnI-TnC 复合物,TnI-TnT复合物,或三元TnI-TnT-TnC复合物,其中二元 TnI-TnC复合物为主要部分。另有少量以游离cTnI,游离cTnT,降解/氧化的cTnI或磷酸化/非磷酸化cTnI形式存在。

    肌钙蛋白-I的分子结构如何组成的?
    肌钙蛋白-I分子由200个氨基酸组成,其心肌特异性在N'端的1~32AA所提供。肌钙蛋白-I的分子结构不是很稳定,在体内或体外会被蛋白水解酶所降解,常从C'端开始,甚至N'端,最稳定的部分在AA 30-110区段。整个分子结构中含有2个丝氨酸,在体内会被蛋白辅酶A所磷酸化。磷酸化后的cTnI分子结构会发生改变,影响抗原抗体的结合。另外。分子结构中的2个半胱氨酸,会被氧化降解,改变结构影响抗原抗体的结合。肌钙蛋白分子表面带强阳电荷,容易干扰Ab-Ag的结合。如,肝素,一个带负电荷的分子,与cTn结合后干扰免疫检测。

    为什么抗体的选择对肌钙蛋白检测的结果正确性十分重要?
    由于肌钙蛋白-I分子结构的不稳定性,所以在进行分析设计中对抗体识别位点的选择就由为重要,直接影响到结果的准确性。抗体识别位置必须选择在分子结构的稳定区域(30-110 AA);抗体针对所有的cTnI形式的识别(游离的,复合的IC, ITC…),实现等分子(Equimolarity)的检测;抗体选择位置不会出现磷酸化和氧化的干扰。

    引起不同厂家生产的cTnI试剂所检测结果不一致的原因是什么?
    造成不同厂家生产的cTnI试剂所测结果不一致的主要原因包括:使用不同的标准品(可能引起2-20 倍差距);抗体的不同而出现的抗原识别位点的不同,如游离的和IC复合物的TnI或不同抗原位点的抗干扰能力,如:蛋白水解酶,磷酸化,氧化等影响和使用不同的样品类型,如:血清,血浆(肝素或EDTA)。

    如何去选择和判定一个优秀的cTn检测试剂?
    一个优秀的cTn试剂应符合NACB/?FCC/ESC/ACC指南中所提及的对检测试剂的要求,我们了解其相应的一些指标,如:<10%CV值与>99%分位值的比值,此值越接近1越好,是反映试剂灵敏度和精密度的一个综合表现。试剂的抗干扰能力,如减少HAMA 效应,嗜异性抗体,RF和其它的分析干扰。降低对样品类型的要求,如可以是血清,血浆(包括肝素抗凝)。样品周转时间(TAT)的要求是否到达<1小时,对检测试剂来说就要考虑分析时间是否足够短,可否使用不会引起干扰的抗凝血浆,检测系统是否具有真正意义的急诊功能等。

    什么是分析灵敏度和功能灵敏度?
    最低检测浓度/极限(Minimal detectable concentration/limit, MDC/MDL)是反映最低可区别于零值的浓度,又称分析灵敏度(Analytical sensitivity)。